1、标准曲线的绘制
准确移取氨基酸标准溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL(相当于氨基酸0,40,80,120,160,200μg)分别置于25mL刻度试管中,加水补充至4mL,然后各加入2%茆三酮溶液和磷酸盐缓冲溶液各1mL,摇匀。置沸水浴中加热15min,取出冷却至室温,加水至刻度,摇匀。静置15min,用分光光度计在570nm波长下以水作参比,用1cm 比色皿测定试液的吸光度,绘制吸光度对氨基酸含量(μg)的标准曲线。
2、样品前处理
准确称取样品约5g (准确至0.001g)于试管,加入6mol/L盐酸溶液约10mL~20mL于沸水浴中水解约6h (对乳化体可先将试样置于沸水浴中破乳 1h~~2h)。加入约1g~2g蜡块约30min后,取出试管冷却。去除蜡块,将溶液移至100mL烧杯中,在酸度计上用碱液调节pH至7.5~8.0,再将溶液移入100mL容量瓶中并加水稀释至刻度,摇匀待用。
3、测定
移取试液(2)1mL~4mL置于25mL刻度试管中,以下按1测定步骤进行。测得吸光度,通过标准曲线计算氨基酸的含量,同时做一空白样。
来源:网络
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