细菌动力学检测方法

　　细菌动力学检测方法是指用于研究细菌生长、繁殖、代谢及对环境或药物响应等动态过程的技术手段。这些方法广泛应用于微生物学、临床诊断、抗生素药敏试验、环境监测和工业发酵等领域。

　　1. 光密度法(OD600 测定)

　　原理：利用分光光度计在600 nm波长处测定细菌悬液的光密度(Optical Density, OD)，间接反映细菌浓度。

　　优点：操作简便、快速、非破坏性。

　　局限：无法区分活菌与死菌;高浓度时可能偏离线性。

　　2. 平板菌落计数法(CFU 法)

　　原理：将细菌稀释后涂布于固体培养基，培养后计数形成的菌落(Colony Forming Units, CFU)。

　　优点：直接反映可培养的活菌数量。

　　局限：耗时长(通常需18–24小时以上);仅适用于可培养菌种。

　　3. 时间-杀菌曲线法(Time-Kill Assay)

　　用途：评估抗菌药物对细菌的动态杀灭效果。

　　方法：在不同时间点取样，进行CFU计数，绘制细菌数量随时间变化的曲线。

　　应用：常用于抗生素药效动力学研究。

　　4. 荧光染色结合显微镜或流式细胞术

　　常用染料：

　　SYTO 9 / 碘化丙啶(PI)：区分活/死菌(LIVE/DEAD BacLight)。

　　DAPI、Hoechst：标记DNA。

　　优点：可实时、定量分析活菌比例;适用于复杂样本。

　　设备：荧光显微镜、共聚焦显微镜或流式细胞仪。

　　5. 生物发光/荧光报告系统

　　原理：将荧光素酶(luciferase)或荧光蛋白(如GFP)基因整合到细菌基因组中，通过发光/荧光强度反映细菌活性或数量。

　　优点：高灵敏度、可实时监测、适用于体内成像。

　　应用：感染模型、药物筛选等。

　　6. 微流控芯片与单细胞追踪

　　技术特点：在微米级通道中培养单个细菌，结合延时显微成像，观察分裂、运动、应激反应等。

　　优势：实现单细胞水平的动力学分析。

　　挑战：设备昂贵、数据分析复杂。

　　7. 代谢活性检测法

　　常用方法：

　　MTT/XTT/WST-1 还原法：检测细菌脱氢酶活性。

　　ATP 生物发光法：通过检测ATP含量反映活菌量。

　　优点：快速、高通量。

　　注意：可能受非细菌来源ATP或还原物质干扰。

　　8. 实时PCR(qPCR)或数字PCR

　　原理：通过定量细菌特异性DNA拷贝数，间接反映细菌数量。

　　优点：灵敏度高、可检测不可培养细菌。

　　局限：不能区分活/死菌(除非结合PMA预处理)。

　　9. 阻抗法(Bactec、Bioscan等系统)

　　原理：细菌代谢改变培养基电导率或pH，引起阻抗变化，自动检测生长信号。

　　应用：血培养、快速药敏检测。

　　10. 拉曼光谱与红外光谱

　　新兴技术：基于细菌代谢产物或细胞成分的光谱特征，实现无标记、实时监测。

　　优势：无需染色或标记，可结合机器学习进行菌种识别与状态判断。

来源：网络