郑州土壤检测机构：土壤细菌qpcr定量步骤详情

　　土壤细菌的 qPCR(实时荧光定量PCR)定量是环境微生物学中常用的技术，用于测定土壤样品中特定细菌类群(如总细菌、功能菌或病原菌)的 16S rRNA 基因拷贝数，从而间接反映其丰度。

　　步骤详解

　　1. 土壤样品采集与保存

　　使用无菌工具采集表层(0–20 cm)或目标深度土壤。

　　去除植物残体、石块等杂质。

　　立即冷冻(−20°C 或 −80°C)保存，避免DNA降解和微生物群落变化。

　　2. 土壤总DNA提取

　　推荐试剂盒：

　　MoBio PowerSoil DNA Isolation Kit(现为 Qiagen DNeasy PowerSoil Pro)

　　FastDNA™ SPIN Kit for Soil(MP Biomedicals)

　　注意事项：

　　土壤中腐殖酸等抑制物会干扰后续PCR，需确保纯化彻底。

　　可加入 BSA(牛血清白蛋白) 或进行 DNA稀释 减少抑制效应。

　　3. DNA质量控制

　　浓度与纯度：用 NanoDrop 测 A260/A280(理想值≈1.8)和 A260/A230(>2.0)。

　　完整性：琼脂糖凝胶电泳检查是否降解。

　　qPCR抑制测试：将样品DNA与已知模板混合扩增，观察Ct值偏移。

　　4. 引物选择(针对细菌16S rRNA基因)

来源：网络